10 % забуференный формалин: почему его нельзя заменить «обычным» формалином

Качество фиксации определяет всё последующее: морфологию на препарате, возможность ИГХ, сохранность нуклеиновых кислот для молекулярных методов (FISH, ПЦР, NGS). Ошибка на этом шаге необратима — переделать гистологическое исследование на той же ткани невозможно.

Что такое нейтральный забуференный формалин (NBF)

Нейтральный забуференный формалин (Neutral Buffered Formalin, NBF) — это 10 % раствор формалина в фосфатном буфере (NaH₂PO₄ + Na₂HPO₄), pH 7,2-7,4. Концентрация 10 % формалина = 4 % формальдегида (потому что коммерческий формалин — 37-40 % раствор формальдегида в воде).

Стандарт фиксации зафиксирован в College of American Pathologists (CAP) Cancer Protocols и WHO Classification of Tumours — без NBF результаты считаются недостоверными.

Чем отличается «обычный» формалин

Если просто разбавить 37-40 % формальдегид водой 1:9 без буфера — получится 10 % формалин в воде с pH 5,5-6,0. Кислая среда вызывает три проблемы:

1. Образование формалинового пигмента (formalin pigment) — кристаллов формалин-хематина в эритроцитарных областях. Тёмно-коричневые гранулы маскируют клетки и могут быть приняты за патологию (например, малярийный пигмент). Bancroft's, ch. 4 описывает это как самую частую преаналитическую ошибку патолога.
2. Денатурация белков с потерей антигенности — для ИГХ требуется сохранность эпитопов; кислая фиксация их разрушает.
3. Деградация нуклеиновых кислот — pH < 6,5 приводит к гидролизу РНК и фрагментации ДНК; молекулярные методы становятся невозможны.

Время и объём фиксации

По CAP HER2 Testing Guideline и ASCO/CAP guidelines:

• Соотношение объёмов: ткань / формалин — не менее 1:10 (ткань 1 см³ — минимум 10 мл NBF).
• Минимальное время фиксации: 6-8 часов для биопсий, 24-48 часов для удалённых органов.
• Максимальное время фиксации: 72 часа — далее эпитопы для ИГХ начинают разрушаться, особенно для гормональных рецепторов (ER, PR), HER2, Ki-67.
• Толщина срезов ткани в фиксации: не более 0,5 см — иначе фиксация центральной части неполная (формалин проникает 1 мм/час).

Контроль качества формалина

В лаборатории необходимо:

1. Регулярно (раз в неделю) проверять pH формалина — должен быть 7,0-7,4. pH-метром или индикаторными полосками.
2. Контролировать концентрацию формальдегида — должно быть 3,7-4,0 % (= 10 % формалин). Аккуратно пометьте бутылку датой открытия — формалин испаряется, и через несколько недель открытая бутылка содержит 6-7 % вместо 10 %.
3. Хранить в тёмной полиэтиленовой таре при +4 …+25 °C, без прямого солнечного света.
4. Утилизировать через сертифицированного оператора опасных отходов — формальдегид внесён в список 1B канцерогенов IARC.

Безопасность работы с формалином

Формальдегид — канцероген группы 1 по классификации IARC, вызывает рак носоглотки и предположительно лейкемию. По OSHA Formaldehyde Standard 1910.1048 предельная концентрация в воздухе рабочей зоны — 0,75 ppm (8 часов) и 2,0 ppm (15 минут).

Минимум защиты в гистолаборатории:

• Вытяжной шкаф или вентилируемый стол с активной аспирацией.
• Нитриловые перчатки (виниловые проницаемы для формальдегида).
• Защитные очки и лабораторный халат.
• Контейнеры для отходов с плотными крышками.
• Готовность к разливу — нейтрализатор формалина (Formex или аналог).

ВИЕНА МЕДИКАЛ поставляет 10 % забуференный формалин производства BioVitrum в фасовке от 250 мл до 5 л — с РУ Минздрава РБ, паспортом качества и SDS на русском языке.